Techniques de glyco-ingénierie multi-niveaux pour générer des IgG avec des Fc-glycans définis

L'immunoglobuline G (IgG) médie ses fonctions immunitaires à travers le complément et les récepteurs cellulaires IgG-Fc (FcγR). L'IgG contient un glycan N-lié évolutivement conservé à la position Asn297 dans le domaine Fc. Ce glycan se compose de niveaux variables de fucose, galactose, acide sialique et N-acétylglucosamine bisectante (bisection). Parmi ces variations, l'absence de fucose augmente fortement la liaison au FcγRIII humain, une découverte actuellement utilisée pour améliorer l'efficacité des anticorps monoclonaux thérapeutiques. L'influence des autres caractéristiques de glycan est largement inconnue, principalement en raison du manque d'outils de glyco-ingénierie. Nous décrivons des méthodes générales pour produire des protéines recombinantes de n'importe quelle glycoforme souhaitée dans des cellules eucaryotes. Des substrats leurres ont été utilisés pour diminuer le niveau de fucosylation ou de galactosylation, des glycosyltransférases ont été surexprimées de manière transitoire pour améliorer la bisection, la galactosylation et la sialylation, et la sialylation in vitro a été appliquée pour une sialylation améliorée. La combinaison de ces techniques permet d'explorer systématiquement l'effet biologique de ces traits de glycosylation pour les IgG et d'autres glycoprotéines.