Quantitation des microARN par RT-qPCR en temps réel

Les microARN (miARN) sont des molécules d'ARN régulatrices d'environ 22 nucléotides qui jouent des rôles importants dans le contrôle des processus développementaux et physiologiques chez les animaux et les plantes. Mesurer le niveau d'expression des miARN est une étape critique dans les méthodes qui étudient la régulation des fonctions biologiques et qui utilisent les profils de miARN comme marqueurs diagnostiques pour le cancer et d'autres maladies. Bien que la quantification de ces petites molécules de miARN par RT-qPCR soit difficile en raison de leur courte longueur et de leur similarité de séquence, un certain nombre de méthodes de quantification de miARN basées sur la RT-qPCR ont été introduites depuis 2004. Les méthodes les plus couramment utilisées sont les tests TaqMan(®) MicroARN basés sur la transcription inverse (RT) en boucle-stem et les matrices. La haute sensibilité et spécificité, la large plage dynamique et le flux de travail simple des tests et des matrices TaqMan(®) MicroARN ont fait de l'analyse TaqMan la méthode de choix pour le profilage de l'expression des miARN et la validation ultérieure. D'autres méthodes, telles que les tests SYBR miARN basés sur la queue poly (A) et la transcription inverse directe, sont également discutées dans ce chapitre.