Un système de vecteur ternaire amélioré pour la transformation rapide du maïs médiée par Agrobacterium

Un système de vecteur ternaire simple et polyvalent qui utilise des plasmides accessoires améliorés pour la transformation rapide du maïs est décrit. Ce système facilite la construction de vecteurs à haut débit et la transformation des plantes. Le plasmide super binaire pSB1 est un pilier de la transformation du maïs. Cependant, la grande taille du vecteur de base rend son clonage difficile, le processus de co-intégration est encombrant et inefficace, et certaines souches d'Agrobacterium sont connues pour donner des mutants spontanés résistants à la tétracycline. Ces limitations présentent des obstacles substantiels à la construction de vecteurs à haut débit. Ici, nous décrivons un système de vecteur ternaire plus petit, plus simple et polyvalent pour la transformation du maïs qui utilise des plasmides accessoires améliorés ne nécessitant pas d'étape de co-intégration. De plus, les plasmides accessoires nouvellement décrits ont restauré des gènes de virulence considérés comme défectueux dans pSB1, ainsi que des gènes de virulence ajoutés. Les tests de différentes configurations des plasmides accessoires en combinaison avec le vecteur binaire T-DNA en tant que vecteurs ternaires doublent presque à la fois la fréquence brute de transformation et le nombre d'événements de transformation de qualité utilisable dans des lignées de maïs difficiles à transformer. Les vecteurs ternaires nouvellement décrits ont permis de développer une méthode de transformation rapide du maïs pour des lignées élites. Ce système de vecteur a facilité le dépistage de différentes origines de réplication sur le plasmide accessoire et le vecteur T-DNA, et quatre combinaisons ont été identifiées ayant une fréquence brute de transformation élevée (86-103%) dans une lignée de maïs élite.