Régulation hormonale, distribution tissulaire et teneur en acide ribonucléique messager et en enzyme du cytochrome P450 aromatase dans les follicules ovariens et les corps jaunes de rat : relation avec la biosynthèse de l'estradiol*

La présente étude a été entreprise pour comparer la teneur en ARNm du cytochrome P450 aromatase (P450arom) avec la teneur en enzyme dans les tissus ovariens de rat et pour relier ces variations à la biosynthèse de l'estradiol par les follicules et les corps jaunes isolés tout au long de la gestation. Une sonde désoxyoligonucléotidique (62-mère) dérivée d'une séquence d'acides aminés de P450arom placentaire humain purifié a été utilisée pour cribler une banque d'expression d'ADNc de cellules de la granulosa de rat dans lambda gt11. Sept clones d'ADNc, d'une taille comprise entre 0,6 et 2,0 kilobases (kb), ont été identifiés et purifiés par plages de lyse. La traduction in vitro utilisant de l'ARNm sélectionné par hybridation avec un insert d'ADNc de P450arom de rat de 1,2 kb a donné un produit de traduction marqué au 35S qui se liait à une immunoglobuline anti-aromatase humaine et comigrait avec l'aromatase placentaire humaine purifiée sur électrophorèse sur gel de polyacrylamide avec dodécylsulfate de sodium, confirmant ainsi que les clones codent bien pour P450arom. En utilisant l'insert d'ADNc de 1,2 kb comme sonde radiomarquée, la régulation hormonale, la distribution tissulaire, la teneur et la taille de l'ARNm du P450arom ont été analysées. Des essais d'hybridation sur filtre ont démontré que l'ARNm de P450arom était faible dans les petits follicules antraux (SA), augmentait d'un facteur 16 dans les follicules préovulatoires (PO) et atteignait un pic dans les cellules de la granulosa en l'espace de 1 h après une dose ovulatoire d'hCG. Dans le corps jaune de gestation, la teneur en ARNm de P450arom était faible au jour 4, augmentait d'un facteur 3 aux jours 7-11 et d'un facteur 10 aux jours 15-19 de gestation. L'ARNm de P450arom diminuait ensuite aux jours 21 et 23, jour de la mise bas. Les analyses Northern de l'ARN des follicules PO et des corps jaunes ont révélé trois bandes d'ARNm de P450arom d'une taille de 3,3, 2,6 et 1,9 kb. Les immunoblots d'extraits cellulaires solubles de follicules SA, PO et lutéinisants (PO plus hCG) et de corps jaunes de gestation ont démontré que l'enzyme aromatase était faible dans les follicules SA, augmentait de 1,5 à 3 fois dans les follicules PO et diminuait dans les 3 à 5 h suivant une dose ovulatoire d'hCG. Les variations de la teneur en enzyme P450arom dans les cellules lutéales pendant la gestation présentaient un profil similaire à celui observé pour l'ARNm de P450arom. En revanche, les variations de la biosynthèse de l'estradiol par les follicules et les corps jaunes n'étaient pas directement corrélées aux teneurs en ARNm et en enzyme P450arom. Par exemple, bien que les corps jaunes isolés aux jours 15 à 21 de gestation contiennent la plus grande quantité d'ARNm et d'enzyme P450arom, ces tissus ne produisaient pas le plus d'estradiol lorsqu'ils étaient incubés pendant 5 h à 37 C en présence d'un substrat androgène aromatisable.(RÉSUMÉ TRONQUÉ À 400 MOTS)