Tolérance aux mutations et modifications chimiques dans un siRNA

L'ARN interférent court (siRNA), l'agent actif de l'interférence ARN, montre des promesses de devenir un outil précieux tant dans la recherche fondamentale que clinique. Nous explorons la tolérance aux mutations et aux modifications chimiques dans diverses parties des deux brins de 21 nt d'un siRNA ciblant le facteur de tissus, initiateur de la coagulation sanguine. Les mutations étaient des transversions G/C. Les modifications chimiques étaient la 2'-O-méthylation, la 2'-O-allylation et les phosphorothioates. Nous avons constaté que le siRNA tolère généralement les mutations à l'extrémité 5', tandis que l'extrémité 3' présentait une faible tolérance. Cette observation peut faciliter la conception de siRNA pour un ciblage spécifique des transcrits contenant des polymorphismes nucléotidiques uniques. Nous démontrons en outre que dans notre système, le brin antisens unique du siRNA de type sauvage est presque aussi efficace que le duplex de siRNA, tandis que la version M2+4 méthylée de l'antisens avait une activité réduite. La plupart des versions chimiquement modifiées testées avaient une activité initiale proche du type sauvage, tandis que l'activité à long terme était augmentée pour certaines espèces de siRNA. Nos résultats peuvent améliorer la conception de siRNAs pour les expériences in vivo.