Vecteurs du virus de l'immunodéficience humaine pour l'expression inductible de gènes étrangers

L'expression dépendante de Tat d'un gène étranger endogène létal ou délétère pourrait être utile pour abroger la production de virus de l'immunodéficience humaine (VIH) à partir de cellules. Ce type de destruction cellulaire induite par le VIH, ainsi que d'autres approches de thérapie génique pour l'infection par le VIH, seraient facilitées par de simples vecteurs VIH qui expriment des gènes introduits de manière inductible par Tat. Dans le cadre d'études visant à examiner la faisabilité de ce concept, nous avons construit des vecteurs VIH-1 qui expriment le gène phosphotransférase de l'hygromycine B (Hygr) de manière dépendante de Tat. La comparaison de l'efficacité de propagation de chaque vecteur indique que des séquences s'étendant dans le cadre de lecture ouvert gag sont nécessaires en cis pour une propagation efficace du vecteur. L'analyse par Southern blot de l'ADN génomique isolé à partir de cellules infectées par le vecteur a démontré que les vecteurs étaient capables d'être propagés comme prévu sans réarrangements grossiers ou délétions. Un fragment du gène de l'hémagglutinine du virus A de la grippe (H5 HA), capable d'éliciter des réponses anticorps et des réponses de cellules T cytotoxiques, a été utilisé comme marqueur pour une caractérisation plus approfondie du système de vecteurs. Un vecteur dépendant de Tat conférant le phénotype H5 HA+ a été testé par immunofluorescence indirecte, et des cellules qui contenaient mais n'exprimaient pas le gène H5 HA ont été isolées. L'activation de l'expression de H5 HA suite à l'infection par le VIH de cellules Tat- qui contenaient de manière stable mais n'exprimaient pas le construct H5 HA a été déterminée comme un processus efficace.