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La fonction physiologique d'un allergène pourrait être un facteur important pour l'allergénicité. L'allergène majeur du pollen d'herbe Phl p 1 présente des similarités de séquence avec les séquences consensus des cystéine protéases. Cependant, jusqu'à présent, l'activité protéolytique de Phl p 1 est controversée. Le surnageant de culture des clones transfectés avec Phl p 1 de Pichia pastoris a montré une activité protéolytique mais cela pourrait être dû à Phl p 1 ou à des contaminants de levure non pertinents. Pour résoudre cette question, nous avons utilisé la technique de zymogramme et l'avons améliorée. Le substrat ainsi que la concentration en substrat ont été modifiés de 1 % de caséine à 0,25 % de poudre de lait écrémé. Pour la coloration, nous avons utilisé une coloration colloïdale de Coomassie (RotiBlue) avec une sensibilité plus élevée et une meilleure praticabilité que la coloration de Coomassie conventionnelle. Les protéines dans les zymogels et dans les gels SDS-PAGE ont montré une mobilité électrophorétique similaire. De plus, les zymogels pouvaient être transférés et immunocolorés. Ainsi, la masse moléculaire des bandes protéolytiques pouvait être déterminée et directement comparée aux résultats d'immunoblotting. Pour attribuer clairement la protéase, nous avons séparé le surnageant de culture du clone P. pastoris transfecté avec Phl p 1 par chromatographie d'affinité avec un anticorps monoclonal. Nos études démontrent que l'activité protéolytique n'appartenait pas à l'allergène recombinant mais aux protéines de levure. L'enzyme a été classée par des tests d'inhibition de zymogramme comme une forte sérine protéase.
Pöppelmann et al. (Mon,) ont étudié cette question.