Complexité de l'expression des déterminants antigéniques, reconnus par les anticorps monoclonaux HMFG-1 et HMFG-2, dans des cellules épithéliales mammaires humaines normales et malignes.

Résumé Les anticorps monoclonaux HMFG-1 et HMFG-2 sont produits par des hybridomes dérivés de la fusion de cellules de la rate de souris immunisées avec des préparations délipidées de globules gras du lait humain. Des tests immunologiques par enzyme liée à un adsorbant (ELISA) de blots Western préparés à partir de gels séparant les composants des globules gras du lait ont montré que les deux anticorps reconnaissent les déterminants présents sur des composants de haut poids moléculaire (400K). Des expériences de blocage par lectines ont indiqué que les deux anticorps reconnaissent des séquences d'oligosaccharides contenant du galactose, de la N-acétylglucosamine et, possiblement, de la N-acétylgalactosamine. Cependant, le déterminant reconnu par HMFG-1 est différent de celui reconnu par HMFG-2, qui peut contenir ou être adjacent à un résidu d'acide sialique non terminal. L'expression de ces déterminants antigéniques par des cellules épithéliales mammaires normales cultivées à partir de lait (HumE) et par une lignée cellulaire de cancer du sein (T47D) a été étudiée. Dans une estimation de radioimmunité par cellules vivantes, des niveaux inférieurs de HMFG-1 que de HMFG-2 étaient nécessaires pour une liaison efficace aux cellules HumE, tandis que HMFG-2 se liait aux cellules T47D à des concentrations plus faibles que HMFG-1. Des expériences cinétiques utilisant des anticorps marqués à l'iode 125 ont montré que des sites de liaison à haute affinité pour les deux anticorps sont présents sur les cellules HumE, mais le nombre de sites liant HMFG-1 est supérieur à celui des sites liant HMFG-2. La cinétique de dissociation des anticorps marqués des cellules T47D a suggéré la présence de plusieurs sites avec différentes affinités pour chaque anticorps. Ce n'est que dans le cas de HMFG-2 que certains de ces sites montraient une forte affinité pour l'anticorps. Les blots Western des composants séparés de lysats cellulaires lorsqu'ils ont été réagis dans un test ELISA ont montré que HMFG-1 interagissait avec des composants de haute masse moléculaire des cellules HumE similaires à ceux observés dans la préparation HMFG. En revanche, des sites à haute affinité pour HMFG-2 étaient exprimés par HumE et T47D sur plusieurs composants de poids moléculaire inférieur. Toutes les autres lignées de carcinome mammaire examinées et les cellules métastatiques de deux patientes atteintes de cancer du sein exprimaient des sites de liaison à haute affinité pour HMFG-2 sur des composants de taille variable (80K à 400K). Seules deux des cinq lignées cellulaires et des cellules cancéreuses de l'une des deux patientes exprimaient des sites à haute affinité pour HMFG-1, et ceux-ci étaient trouvés sur des glycoprotéines de poids moléculaire élevé (300-400K). Les résultats sont compatibles avec l'interprétation selon laquelle le déterminant HMFG-1 est présent dans de grandes molécules glycoprotéiques avec des chaînes latérales de glucides complexes, et le déterminant HMFG-2 est plus couramment trouvé dans des molécules plus petites où la glycosylation peut être incomplète et les résidus d'acide sialique plus exposés. La liaison préférentielle de HMFG-2 à certains cancers du sein peut donc refléter un modèle de glycosylation modifié dans ces cellules.