Cartographie des interactions protéine-protéine au sein du complexe de kinase dépendante de l'ADN

Dans les cellules des mammifères, les protéines Ku et la sous-unité catalytique de la kinase dépendante de l'ADN (DNA-PKcs) sont nécessaires pour la réparation correcte et efficace des cassures double brin de l'ADN. Ku se compose de deux sous-unités étroitement associées d'environ 69 et 83 kDa, appelées respectivement Ku70 et Ku80 (ou Ku86). Auparavant, plusieurs régions des deux sous-unités Ku ont été démontrées comme étant impliquées dans leur interaction, mais le mécanisme moléculaire de cette interaction reste inconnu. Nous avons identifié une région dans Ku70 (résidus d'acides aminés 449-578) et une région dans Ku80 (résidus 439-592) qui participent à l'interaction des sous-unités Ku. L'analyse des séquences révèle que ces régions d'interaction partagent une homogénéité de séquence et suggère que les sous-unités Ku sont structurellement liées. En se liant à une cassure double brin d'ADN, Ku est capable d'interagir avec DNA-PKcs, mais la manière dont cette interaction est médiée n'a pas été définie. Nous montrons que l'extrême C-terminale de Ku80, spécifiquement les 12 derniers résidus d'acides aminés, médiatise une interaction hautement spécifique avec DNA-PKcs. Fait remarquable, ces résidus semblent être conservés uniquement dans les séquences de Ku80 des organismes vertébrés. Ces données suggèrent que Ku a évolué pour devenir une partie de l'holo-enzyme DNA-PK par l'acquisition d'un motif d'interaction protéine-protéine à l'extrémité C-terminale de Ku80.