Le domaine C terminal de Ku80 active la sous-unité catalytique de la kinase protéique dépendante de l'ADN

Ku est une protéine hétérodimérique ayant une activité de liaison aux extrémités d'ADN double brin qui opère dans le processus de jonction d'extrémités non homologues. On pense que Ku cible le complexe de la kinase protéique dépendante de l'ADN (DNA-PK) à l'ADN et, une fois lié à l'ADN, peut interagir et activer la sous-unité catalytique de DNA-PK (DNA-PKcs). Nous avons réalisé une analyse de suppression 3' de Ku80, la plus grande sous-unité de Ku, et montré que les 178 résidus aminés C-terminal sont dispensables pour l'activité de liaison aux extrémités de l'ADN mais sont nécessaires pour une interaction efficace de Ku avec DNA-PKcs. Les cellules exprimant des protéines Ku80 dépourvues des 178 résidus terminaux ont une faible activité de DNA-PK, sont sensibles aux radiations et peuvent recombiner les jonctions de signal mais pas les jonctions codantes lors de la recombinaison V(D)J. Ces cellules ont donc acquis le phénotype des cellules SCID de souris malgré l'expression de la protéine DNA-PKcs, suggérant qu'une interaction entre DNA-PKcs et Ku, impliquant la région C-terminale de Ku80, est requise pour le rejointement des cassures doubles brins d'ADN et la formation de jonctions codantes mais pas de jonctions de signal. Pour obtenir davantage d'informations sur les domaines importants de Ku80, nous rapportons un changement mutationnel ponctuel dans Ku80 dans la lignée cellulaire défectueuse xrs-2. Ce résidu est conservé parmi les espèces et se situe en dehors du domaine d'interaction Ku70-Ku80 précédemment rapporté. Le changement mutationnel, néanmoins, abroge l'interaction Ku70-Ku80 et l'activité de liaison aux extrémités de l'ADN.