Procédure rapide pour la détection et l'isolement de grands et petits plasmides

Des procédures sont décrites pour la détection et l'isolement de plasmides de différentes tailles (2,6 à 350 mégadaltons) qui sont hébergés dans des espèces d'Agrobacterium, Rhizobium, Escherichia, Salmonella, Erwinia, Pseudomonas et Xanthomonas. La méthode utilise les caractéristiques moléculaires de l'acide désoxyribonucléique (ADN) circulaire fermé de manière covalente qui est libéré des cellules dans des conditions qui dénaturent l'ADN chromosomique en utilisant du sodium dodécyl sulfate alcalin (pH 12,6) à des températures élevées. Les protéines et les débris cellulaires ont été éliminés par extraction avec du phénol-chloroforme. Dans ces conditions, les concentrations d'ADN chromosomique ont été réduites ou éliminées. L'extrait clarifié a été utilisé directement pour l'analyse électrophorétique. Ces procédures ont également permis l'isolement sélectif de l'ADN plasmidique qui peut être utilisé directement dans la traduction de nick, l'analyse par endonucléase de restriction, la transformation et les expériences de clonage d'ADN.