Une approche de l'analyse des plus proches voisins des protéines membranaires

Résumé Dans des expériences sur des membranes de globules rouges humaines isolées, des liaisons croisées entre les composants protéiques ont été produites à la fois par l'oxydation catalysée des groupes sulfhydryles intrinsèques avec le complexe ionique cuprique de l'o-phénanthroline et par réaction avec le diméthyl dithiobispropionimidate, un bisalkylimidate contenant un lien disulfure entre les deux groupes réactifs. Le mélange de espèces moléculaires a été analysé par une procédure d'électrophorèse sur gel bidimensionnelle dans laquelle les liaisons croisées sont rompues par clivage réducteur lors d'une phase initiale de la séparation dans la deuxième dimension. Les complexes liés par des liaisons croisées sont reconnus par les positions des éléments hors diagonale dans le motif final. Des complexes apparemment dérivés d'oligomères stables de peptides ayant le même poids moléculaire ont été trouvés, correspondant à de nombreuses bandes dans le motif de gel de sulfate de sodium standard. Des hétérocomplexes formés par des peptides de poids moléculaire différent ont été identifiés de manière tentative dans quelques cas, mais sont moins courants que les oligomères à partir de bandes uniques. De plus, le croisement produit de très hauts complexes de poids moléculaire de spectrine et de nombreux composants protéiques de poids moléculaire inférieur de la membrane. Les motifs de croisement observés sont compatibles avec l'image de composants de surface transmembranaires et cytoplasmiques ancrés au réseau sous-membranaire de fibres de spectrine. Les motifs de croisement des fantômes cassés et des cellules intactes traitées avec ces réactifs perméables à la membrane sont presque identiques, sauf pour l'ajout de complexes d'hémoglobine dans ce dernier cas.