Analyse des mutations dans les cellules humaines en utilisant un système de navette du virus Epstein-Barr.

Nous avons développé des systèmes de vecteurs de navette hautement sensibles pour la détection des mutations formées dans les cellules humaines en utilisant des dérivés du virus Epstein-Barr (EBV) qui se répliquent de manière autonome. Des vecteurs EBV portant le gène lacI bactérien comme cible de mutation ont été établis dans les cellules humaines et retournés ensuite à Escherichia coli pour une détection et une analyse rapides des mutations lacI. La majorité des lignées cellulaires clonales créées par l'établissement du vecteur lacI-EBV présentent des fréquences de LacI spontanées inférieures à 10(-5) et sont adaptées aux études de mutation induite. La capacité à isoler des lignées clonales représente un avantage majeur des vecteurs EBV par rapport aux vecteurs de navette se répliquant de manière transitoire (comme ceux dérivés du virus simien 40) pour l'étude de la mutation. Les changements dans la séquence d'ADN ont été déterminés pour 61 mutations lacI induites par l'exposition d'une des lignées cellulaires à la N-nitroso-N-méthylurée. Un total de 33 des 34 mutations nonsense lacI et 26 des 27 mutations missense impliquent des transitions G X C à A X T. Ces données soutiennent la théorie mutationnelle du cancer.