Biosynthèse de MAM-6, une sialomucone épithéliale. Preuves de l'implication d'un rare stade de clivage protéolytique dans le réticulum endoplasmique.

MAM-6 est une sialomucone épithéliale majeure qui est abondamment présente à la surface apicale des cellules ductales et alvéolaires des tissus normaux et sur de nombreuses cellules carcinomateuses différentes. MAM-6, tel que défini par des anticorps monoclonaux, se compose d'une ou deux glycoprotéines sialylées avec des masses moléculaires apparentes de plus de 400 kDa dans des conditions réductrices et non réductrices. La mobilité et le nombre de glycoprotéines immunoprécipitées varient en fonction de la lignée cellulaire d'origine. Nous avons utilisé des techniques d'immunoprécipitation pour étudier la biosynthèse et la glycosylation de cette mucine. La biosynthèse de MAM-6 a été étudiée dans la lignée cellulaire de cancer du sein ZR-75-1. Deux glycoprotéines avec des masses moléculaires apparentes d'environ 450 et 650 kDa, représentant la forme mature, ont été immunoprécipitées. Par analyse des impulsions, nous montrons que la biosynthèse de la glycoprotéine de 450 kDa s'est déroulée à travers des intermédiaires de 220, 200 et 500 kDa qui sont devenus perceptibles après 1, 4 et 30 minutes, respectivement. La biosynthèse de la glycoprotéine de 650 kDa a suivi un cours similaire à travers des intermédiaires de 380, 350 et 700 kDa. Le traitement des précurseurs de 220 et 350 kDa implique une étape de clivage protéolytique rare qui se produit dans le réticulum endoplasmique. Les précurseurs tardifs de 500/700 kDa, observés après 30 minutes de traîne, et les glycoprotéines matures ont été générés par une glycosylation O-lien extensive. La formation des précurseurs de 500/700 kDa n'a pas été affectée par la monensine. Cependant, la dernière étape de maturation, la sialylation des précurseurs de 500/700 kDa, pouvait être inhibée par la monensine. L'extensive glycosylation O-liée provoque le poids moléculaire apparemment élevé tel qu'observé par l'électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de sulfate de sodium dodécyle. Nos données sur la biosynthèse montrent que les précurseurs précoces de MAM-6 contiennent des glycans N-liés, suggérant la présence de glycans N-liés sur la molécule mature de MAM-6. Bien que la coprésence de glycans N- et O-liés ait été trouvée sur de nombreuses molécules, aucun glycan N-lié n'a été signalé sur des glycoprotéines de mucus auparavant.