Gélatinase B de souris

La gélatinase B est une métalloprotéinase de matrice régulée ayant un rôle important dans le remodelage des matrices extracellulaires et des membranes basales. Pour étudier la structure et la fonction de la gélatinase B chez la souris, l'ADNc a été cloné à partir d'une lignée cellulaire de macrophages (WEHI-3). À l'aide de cet ADNc, un clone cosmidique avec le gène murin a été isolé. Le gène complet (8 kbp) a été séquencé et comparé à la structure du gène humain. Il y avait 78 % de similarité au niveau de l'ADNc et la structure exon/intron du gène murin était similaire à celle de l'humain. Sur le côté 5' non traduit, 1200 pb de la région du promoteur/amplificateur ont été séquencés et ont révélé plusieurs sites de liaison pour des facteurs trans-agissants. Le site d'initiation de la transcription de l'ARNm a été déterminé par analyse d'extension de primer non isotopique. L'amplification par réaction en chaîne de la polymérase des ADNc a fourni des preuves indirectes d'une interruption de transcription inverse dans l'ARNm des cellules WEHI-3. La structure protéique dérivée de l'ADN chez la souris montrait 82 % de similarité avec celle de l'humain. Cette similarité se reflétait fonctionnellement par la réactivité croisée de la protéine murine avec un antisérum contre la gélatinase B humaine. La production de gélatinase B murine a été étudiée au niveau des protéines par zymographie et au niveau de l'ARNm par analyse de Northern blot. Dans les cellules WEHI-3, la protéine gélatinase B est induite par le lipopolysaccharide bactérien, l'ester de phorbol, l'ARN double brin et la cytokine interleukine-1. La régulation de l'activité et l'hétérogénéité structurelle de la gélatinase B dans les cellules WEHI-3 ont été montrées comme se produisant au niveau de la régulation génique, par l'expression de l'inhibiteur de métalloprotéinases de matrice TIMP-1, et par la glycosylation de la protéine sécrétée.