Manipulation du génome du coronavirus à l'aide de recombinaison ciblée de l'ARN avec des coronaviruses chimériques interspécifiques

La recombinaison ciblée de l'ARN s'est révélée être un outil puissant pour l'ingénierie génétique du génome du coronavirus, en particulier dans sa partie 3'. Ici, nous décrivons les procédures pour la génération de virus de l'hépatite murine recombinants et mutants et de virus de la péritonite contagieuse féline. La clé de la méthode en deux étapes est la sélection efficace des virus recombinants basée sur le changement de cellules hôtes. La première étape consiste en la préparation---en utilisant ce principe de sélection--d'un coronavirus chimérique interspécifique. Dans ce virus, l'ectodomaine de la glycoprotéine de pointe est remplacé par celui d'un coronavirus avec un tropisme spécifique à une autre espèce. Dans la deuxième étape, ce virus chimérique est utilisé comme récipiendaire pour la recombinaison avec de l'ARN donneur synthétique portant le gène de pointe original. Les virus recombinants sont ensuite isolés sur la base de leur tropisme cellulaire naturel retrouvé (par exemple, murin ou félin). D'autres mutations créées dans l'ARN donneur peuvent être co-ïncorporées dans le virus recombinant afin de générer des virus mutants.