Optimisation de la caractérisation à haut débit des vecteurs viraux par ultracentifugation analytique à équilibrage de gradient de densité

Les thérapies géniques et vaccins basés sur des vecteurs viraux nécessitent une caractérisation précise des espèces de capsides. La méthode de référence actuelle pour évaluer le chargement de capsides du virus adénovirus associé (AAV) est l'ultracentifugation analytique par vitesse de sédimentation (SV-AUC). Cependant, l'analyse SV-AUC routine est souvent limitée par la taille, notamment sans l'utilisation de techniques avancées (par exemple, balayage gravitationnel) ou lors de l'acquisition des données multi-longueurs d'onde nécessaires à l'évaluation de la fraction de chargement des vecteurs viraux, et nécessite une analyse par des logiciels spécialisés. L'AUC à égalité de gradient de densité (DGE-AUC) est une méthode analytique largement simplifiée qui fournit une séparation haute résolution des biologiques de différentes densités (par exemple, capsides virales vides et pleines). L'analyse requise est significativement plus simple que celle de la SV-AUC, et des particules virales plus grandes telles que l'adénovirus (AdV) sont susceptibles d'être caractérisées par DGE-AUC en utilisant des gradients de chlorure de césium. Cette méthode fournit des données haute résolution avec une quantité d'échantillon significativement réduite (amélioration estimée de 56 fois en sensibilité par rapport à la SV-AUC). L'analyse multi-longueurs d'onde peut également être utilisée sans compromettre la qualité des données. Enfin, la DGE-AUC est indifférente aux sérotypes et susceptible d'une interprétation intuitive et d'une analyse (ne nécessitant pas de logiciel AUC spécialisé). Ici, nous proposons des suggestions pour optimiser les méthodes DGE-AUC et démontrons une analyse de conditionnement à haut débit d'AdV avec l'AUC, en analysant jusqu'à 21 échantillons en 80 minutes.