Purification des protéines nucléaires qui se lient à l'ADN endommagé par le cisplatine. Identité avec les protéines à hautes mobilités group 1 et 2.

Les processus biochimiques responsables de la reconnaissance et de la réparation de l'ADN endommagé par le cisplatine dans les cellules humaines ne sont pas bien compris. Nous avons développé une technique de précipitation d'affinité pour l'ADN endommagé qui permet la visualisation directe et la caractérisation des protéines cellulaires qui se lient à l'ADN endommagé par le cisplatine. La méthode sépare les protéines liant l'ADN endommagé des mélanges cellulaires radiomarqués complexes et les résout ensuite en polypeptides individuels par électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de sulfate de sodium dodécyl. Cette technique est complémentaire aux analyses de retardement de gel et de Southern blotting qui ont été précédemment utilisées pour identifier les composants cellulaires qui se lient spécifiquement à l'ADN endommagé par le cisplatine. En utilisant cette technique, nous avons caractérisé un ensemble de protéines nucléaires HeLaS3 de 26,5, 28, 90 et 97 kDa qui se lient spécifiquement aux adduits ADN-cisplatine. Des études de compétition avec de l'ADN endommagé par le cisplatine soluble ont confirmé ces résultats. Les principales protéines liant l'ADN endommagé par le cisplatine de 26,5 et 28 kDa ont reconnu les adduits d'ADN modifiés avec le cisplatine mais pas avec son trans-isomère ou avec des radiations UV. Ces protéines ont été purifiées 450 fois pour atteindre presque l'homogénéité par chromatographie d'échange d'ions et chromatographie d'affinité pour l'ADN endommagé par le cisplatine. L'analyse de la séquence du terminal amino a montré que les protéines de 26,5 et 28 kDa étaient identiques aux protéines à hautes mobilités group (HMG) HMG-2 et HMG-1, respectivement.