Chromosome artificiel humain avec un centromère conditionnel pour la livraison de gènes et l'expression génique

Les chromosomes artificiels humains (HAC), qui portent un centromère entièrement fonctionnel et sont maintenus comme un épissome à copie unique, ne sont pas associés à une mutagenèse aléatoire et offrent un meilleur contrôle sur l'expression des gènes ectopiques sur le HAC. Récemment, nous avons généré un HAC avec un centromère conditionnel, qui inclut la séquence de l'opérateur tétracycline (tet-O) intégrée dans l'array d'ADN alphoid. Ce centromère conditionnel peut être inactivé, entraînant la perte de l'alphoid(tet-O) (HAC tet-O) par l'expression de protéines de fusion tét-represseur. Dans ce rapport, nous décrivons l'adaptation du vecteur HAC tet-O pour la livraison de gènes et l'expression génique dans des cellules humaines. Un cassette loxP a été insérée dans le HAC tet-O par recombinaison homologue dans des cellules DT40 de poulet après un transfert chromosomique médié par microcellule (MMCT). Le HAC tet-O avec la cassette loxP a ensuite été transféré dans des cellules ovariennes de hamster chinois, et le gène transgénique EGFP a été incorporé de manière efficace et précise dans le vecteur HAC tet-O. Le gène transgénique EGFP a été exprimé de manière stable dans des cellules humaines après transfert via MMCT. Comme les transgènes insérés sur le HAC tet-O peuvent être éliminés des cellules par perte de HAC due à l'inactivation du centromère, ce système de vecteur HAC offre des caractéristiques novatrices importantes et a des applications potentielles pour les études d'expression génique et la thérapie génique.