Preuves que la catalyse de la protéine-tyrosine-phosphatase se déroule via un intermédiaire cystéine-phosphate.

Une protéine-tyrosine-phosphatase recombinante a été exprimée dans Escherichia coli et purifiée jusqu'à une bande unique par électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de sodium dodécyl sulfate utilisant la chromatographie d'affinité. Lorsque la phosphatase a été autorisée à réagir avec des substrats marqués au 32P, puis rapidement dénaturée, une phosphoprotéine marquée au 32P a pu être visualisée par électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de sodium dodécyl sulfate. Une formation transitoire d'une phosphoprotéine marquée au 32P a été observée, et la protéine marquée au 32P a disparu à mesure que le substrat était consommé. En présence de phosphate p-nitrophényl marqué au 32P, 0,27 mol de phosphate a été incorporé par mol de protéine-tyrosine-phosphatase. La mutagenèse dirigée par site d'un résidu de cystine catalytiquement essentiel (position 215) dans la protéine recombinante a entraîné une enzyme inactive, et aucune phosphoprotéine n'a été formée. La phosphoprotéine marquée au 32P a montré une labilité maximale entre les pH 2,5 et 3,5 et a été rapidement décomposée en présence d'iode. Ces propriétés, ainsi que des mutations supplémentaires dirigées par site, suggèrent que la protéine-tyrosine-phosphatase forme un lien thiol phosphate covalent entre Cys215 et le phosphate.