La sécrétion stimulée du facteur von Willebrand endothélial s'accompagne d'une redistribution rapide à la surface cellulaire de la protéine membranaire GMP-140 des granules intracellulaires

Nous avons examiné la redistribution dépendante de l'activation cellulaire de la protéine membranaire GMP-140 des granules intracellulaires des cellules endothéliales humaines. Par immunofluorescence à double marquage, la distribution de GMP-140 au sein des cellules endothéliales humaines de veine ombilicale cultivées a coïncidé avec la distribution du facteur von Willebrand (vWF), suggérant que GMP-140 est situé dans les membranes des granules de stockage contenant vWF. La stimulation de la sécrétion de vWF a entraîné une augmentation de GMP-140 à la surface cellulaire, comme détecté par une augmentation de la liaison de l'anticorps monoclonal S12 qui reconnaît le domaine extracytoplasmique de GMP-140. Pour chaque agoniste testé (histamine, thrombine, phorbol 12-myristate 13-acétate et l'ionophore calcique A23187), une redistribution_DEPENDANTE de GMP-140 à la surface endothéliale a été observée, qui a parallèlement augmenté de manière dose-dépendante avec la sécrétion de vWF dans le surnageant cellulaire. Lorsque les cellules ont été maximument stimulées par l'histamine en présence de l'anticorps S12, une augmentation 4 fois plus importante de l'absorption de S12 par les cellules a été observée. Cette augmentation est survenue rapidement et a atteint un plateau après 10 minutes. En revanche, lorsque les cellules stimulées par l'histamine ont été d'abord fixées avec du paraformaldéhyde ou refroidies à 4 degrés C avant l'ajout de l'anticorps S12, seule une augmentation transitoire de GMP-140 à la surface cellulaire a été détectée. Dans ces conditions de turnover membranaire arrêté pendant la liaison de l'anticorps, GMP-140 à la surface cellulaire a atteint son maximum 3 minutes après la stimulation par l'histamine et a ensuite diminué à des niveaux de contrôle après 20 minutes. Ces données suggèrent que la sécrétion stimulée de vWF par les cellules endothéliales implique la fusion de granules de stockage contenant vWF avec la membrane plasmique. Une fois inséré dans la membrane plasmique, GMP-140 est ensuite retiré de la surface endothéliale, très probablement par un mécanisme endocytaire.