Amplification de la biotine des signaux de biotine et de peroxydase de raifort dans les colorations histochimiques.

Une procédure est décrite pour intensifier les réactions histochimiques par amplification des sites biotinylés. Cela est réalisé par le dépôt de tyramine biotinylée sur le tissu grâce à l'action enzymatique de la peroxydase de raifort (HRP). Les sites biotinylés amplifiés sont ensuite visualisés en les liant à l'avidine, à laquelle un marqueur est attaché. Cette amplification augmente considérablement la sensibilité des procédures de coloration employant la HRP (et/ou la biotine) dans les tissus. Pour les méthodes de traçage de voies neuroanatomiques, la procédure augmente grandement la détectabilité du traceur injecté. Pour l'histochimie des lectines et l'immunohistochimie, l'amplification nécessite que la lectine ou l'anticorps primaire soit fortement dilué. Cette dilution entraîne moins de coloration de fond et pourtant de forts signaux sont produits même lorsque des réactifs très dilués sont utilisés. En outre, l'amplification permet des incubations beaucoup plus courtes avec des anticorps primaires lorsque des dilutions sont utilisées qui seraient normalement utilisées avec des techniques de pont conventionnelles. La procédure est également utile pour amplifier des signaux très faibles, tels que ceux des immunoréactions dans des tissus fixés au glutaraldéhyde. La procédure d'amplification, associée à la disponibilité de sondes d'avidine marquées par des fluorochromes, de l'or colloïdal ou des systèmes enzymatiques autres que la HRP, fournit un moyen d'augmenter considérablement la polyvalence d'une variété de réactions histochimiques, y compris celles pour détecter des sondes d'hybridation in situ, en plus d'augmenter la sensibilité des réactions.