Les ponts disulfure d'une protéine immunoglobuline G1 de souris

(35)SCystine-labelisée immunoglobuline MOPC21 (IgG1) a été préparée à partir de cellules de myélome en culture tissulaire. Une protéine de myélome porteur a été ajoutée et la protéine a été digérée avec de la pepsine. Le digest a été fractionné sur Sephadex G-50 en deux fractions, à nouveau digérées avec de la trypsine et encore fractionnées sur Sephadex. Les peptides de ponts disulfure ont été purifiés par électrophorèse et chromatographie et identifiés par radioautographie. Un peptide de 96 résidus a été isolé, contenant à la fois le pont disulfure interchaîne lourd-léger et tous les ponts disulfure inter-chaîne lourde. D'autres peptides ont été isolés, représentant tous les ponts disulfure intrachaîne (qui pouvaient être placés par homologie avec des protéines d'autres espèces), sauf pour la section variable de la chaîne légère. Les séquences décrivant ce pont disulfure manquant ont été obtenues à partir de chaînes légères totalement réduites et alkylées. Des peptides liés au peptide de pont disulfure interchaîne ont été isolés à partir de la protéine de myélome partiellement réduite et alkylée et de la chaîne lourde totalement réduite. Le peptide de pont disulfure interchaîne a été placé en position C-terminal du fragment F(ab')(2), préparé par digestion de la protéine avec de la pepsine à pH 4,0. Les séquences des ponts disulfure intrachaîne de la chaîne lourde de l'immunoglobuline MOPC 21 sont comparées avec des séquences homologues provenant de protéines de myélome de souris d'autres sous-classes et de protéines d'autres espèces.