Éléments transcriptionnels positifs et négatifs du gène de la collagénase de type IV humaine.

La protéolyse par la collagénase de type IV (T4) a été impliquée dans le processus de métastase tumorale. Le gène T4 est exprimé dans les fibroblastes, mais pas dans les cellules épithéliales normales, et son expression est spécifiquement réprimée par l'oncogène E1A du virus adénovirus. Nous présentons une enquête sur les éléments transcriptionnels responsables de l'expression basale, répressible par E1A, et spécifique aux tissus. L'analyse par suppression 5', le footprinting DNase I et les tests de mobilité sur gel ont révélé un puissant élément amplificateur répressible par E1A, r2, situé à environ 1 650 paires de bases en amont du site de démarrage. Cet amplificateur a lié une protéine dont la spécificité de liaison est très similaire à celle du facteur de transcription AP-2. Une séquence de silencieur puissante a été trouvée 2 à 5 paires de bases en aval de cet amplificateur. Le silencieur a réprimé la transcription des éléments amplificateurs r2 ou AP-1 et dans le contexte des promoteurs de gènes de collagénase de type IV ou de thymidine kinase (tk) ; la transcription sans amplificateur depuis ce dernier promoteur de base a également été réprimée. Le silencieur se composait de deux éléments de silencieur contigus et fonctionnant de manière autonome. La régulation négative de la transcription de T4 par au moins deux facteurs a été démontrée. Les protéines mcf-7 liant spécifiquement les deux éléments ont été détectées par des tests de mobilité sur gel ; une protéine d'environ 185 kDa qui se liait à l'un de ces éléments a été détectée par liaison croisée ADN-protéine. Le silencieur a réprimé la transcription, dans un contexte d'amplificateur r2-promoteur tk, de manière beaucoup plus efficace dans les cellules non productrices de T4 (mcf-7 ou HeLa) que dans les cellules productrices de T4 (HT1080), suggérant que le silençage spécifique au type cellulaire pourrait contribuer à la régulation de ce gène.