Inactivation à froid de la glycogène phosphorylase*

Il a été constaté que la glycogène phosphorylase b est plus sensible au stockage à 0° qu'à 20° dans un tampon glycérophosphate-cystéine à pH 6,0. Après stockage à des températures froides, l'activité enzymatique est perdue, un matériau hétérogène peut être détecté dans l'ultracentrifugeuse, et un déplacement et une augmentation de l'absorbance du phosphate de pyridoxal lié à l'enzyme se produisent vers des longueurs d'onde plus courtes. L'inactivation peut être inversée lors du réchauffement. Bien que la vitesse initiale de l'inactivation à froid de la phosphorylase b ait montré un comportement cinétique de premier ordre à toutes les concentrations de protéines, l'ensemble du processus d'inactivation ne peut être décrit par la loi du premier ordre qu'à faibles concentrations de protéines. L'inactivation est effectivement ralentie par le glycogène, le phosphate de pyridoxal, l'AMP, l'ATP, les solvants organiques et le tampon à pH 6,8, et est accélérée à pH 6,0 en présence de cystéine et de NaCl. Un graphique d'Arrhenius des activités de phosphorylase b à pH 6,0 montre une discontinuité marquée à environ 13°, avec des énergies d'activation de 17 000 et 46 000 calories pour les membres supérieur et inférieur, respectivement. La phosphorylase b réduite par NaBH4 est également sensible au froid. La phosphorylase a, en contraste avec la phosphorylase b, est sensible au froid uniquement dans des solutions à haute force ionique. Les données présentes suggèrent que l'inactivation de la phosphorylase résulte d'un changement conformationnel de la structure enzymatique induit par des températures froides et n'est pas causée par une perte de phosphate de pyridoxal lié à l'enzyme.