Phosphorylation dépendante de l'état de liaison au cycle cellulaire et à la chromatine des complexes hétérohexamériques MCM humains

La famille de protéines MCM chez les mammifères, comptant actuellement six membres, existe dans le noyau sous deux formes, liée à la chromatine et non liée. La première se dissocie de la chromatine au fur et à mesure de la progression dans la phase S. Récemment, nous avons établi une procédure pour isoler des complexes liés et non liés à la chromatine contenant les six protéines MCM humaines (hMCM) par immunoprécipitation. Dans cette étude, nous avons appliqué cette procédure à des cellules HeLa synchronisées dans chacune des phases G1, S et G2/M et avons pu détecter des complexes hétérohexamériques hMCM dans les trois. De plus, en fonction du cycle cellulaire et de l'état d'association à la chromatine, les hMCM2 et 4 dans les complexes ont montré divers changements de leurs états de phosphorylation. En concentrant notre attention sur l'hyperphosphorylation de la phase G2/M, nous avons trouvé que les hMCM2 et 4 dans les complexes étaient de bons substrats pour cdc2/cycline B in vitro. De plus, lorsque la kinase cdc2 a été inactivée dans des cellules murines FT210 mutantes sensibles à la température, l'hyperphosphorylation des MCM2 et MCM4 murins et la libération des MCM de la chromatine pendant la phase G2 ont été fortement altérées. Dans l'ensemble, les données suggèrent que les six protéines MCM mammifères fonctionnent et subissent une régulation dépendante du cycle cellulaire en tant que complexes hétérohexamériques et que la phosphorylation des complexes par la kinase cdc2 pourrait être l'un des mécanismes régulant négativement l'association entre le complexe MCM et la chromatine.