Plasmodium knowlesi fournit un système de transfection rapide in vitro et in vivo qui permet des études de knockout génique par double crossover.

La technologie de transfection pour les parasites du paludisme fournit un outil précieux pour analyser la fonction génique et corréler le génotype avec le phénotype. Les modèles de transfection sont encore plus précieux lorsque des modèles animaux appropriés sont disponibles en plus de systèmes in vitro complets pour pouvoir analyser pleinement les interactions hôte-parasite. Ici, nous décrivons le développement d'un tel modèle en utilisant le paludisme chez les primates non humains, Plasmodium knowlesi. Les parasites au stade sanguin ont été adaptés à une culture in vitro de longue durée. Les parasites adaptés in vitro pouvaient se réadapter à une croissance in vivo et retrouver des caractéristiques de type sauvage après un passage unique à travers un singe rhésus intact. Les parasites de P. knowlesi, qu'ils soient adaptés in vitro ou dérivés in vivo, ont été transfectés avec succès pour générer des parasites knockout de la protéine circumsporozoïte (CSP) par des mécanismes de double crossover. Des parasites knockout de CSP, transfectés in vitro et clonés, ont été dérivés en seulement 18 jours. L'évaluation microscopique des oocystes en développement provenant de moustiques ayant été nourris de parasites knockout de CSP a confirmé l'altération de la formation de sporozoïtes observée dans les parasites knockout de CSP de P. berghei. Le modèle P. knowlesi est actuellement le seul système de paludisme qui combine des procédures de manipulation génétique double crossover rapides et précises avec des possibilités complètes tant in vitro qu'in vivo. Cela permet une analyse complète des relations génotype-phénotype de P. knowlesi et des interactions hôte-parasite dans un système étroitement lié aux humains.