La réaction du cytochrome c et c2 avec le centre de réaction de Rhodobacter sphaeroides implique le domaine de la crevasse hème

Afin de définir le domaine d'interaction sur le cytochrome c2 de Rhodobacter sphaeroides pour le centre de réaction photosynthétique, les groupes amino lysine chargés positivement sur le cytochrome c2 ont été modifiés pour former des lysines chargées négativement (carboxydinitrophényl)- (CDNP-). Le mélange de réaction a été séparé en plusieurs fractions différentes par chromatographie d'échange d'ions sur (carboxyméthyl)cellulose. Les digests tryptiques de ces fractions ont été analysés par cartographie des peptides en phase inverse pour déterminer les lysines qui avaient été modifiées. La fraction A s'est révélée être un mélange de dérivés étiquetés individuellement modifiés aux lysines-35, -88, -95, -97, et -105 ainsi que plusieurs autres lysines non identifiées représentant 32 % du total. Bien qu'il n'ait pas été possible de résoudre ces dérivés, toutes les lysines identifiées se trouvent sur la surface avant du cytochrome c2 près de la crevasse hème. La constante de vitesse d'ordre supérieur pour la réaction du cytochrome c2 natif avec les centres de réaction était de 2,0 X 10(8) M-1 s-1, tandis que pour la fraction A, elle était 20 fois moins, soit 1,0 X 10(7) M-1 s-1. Cela suggère que les lysines entourant la crevasse hème du cytochrome c2 sont impliquées dans des interactions électrostatiques avec les groupes carboxylate au site de liaison du centre de réaction. Les vitesses de réaction des dérivés de cytochrome c de cœur de cheval modifiés aux groupes amino lysine uniques avec trifluoroacétate ou trifluorométhylphénylcarbamoïl ont également été mesurées. La modification des lysines-8, -13, -27, -72, -79, et -87 entourant la crevasse hème a considérablement réduit la vitesse de réaction, tandis que la modification des lysines dans d'autres régions n'a eu aucun effet. Cela indique que la réaction du cytochrome c de cœur de cheval avec le centre de réaction implique également le domaine de la crevasse hème.