Contacts entre les récepteurs hormonaux stéroïdiens et les thymines dans l'ADN : une méthode d'interférence.

Comprendre les mécanismes par lesquels les protéines régulatrices reconnaissent l'information génétique stockée dans l'ADN repose sur la disponibilité de méthodes pour analyser leur interaction avec des nucléotides individuels et leurs groupes réactifs. Ici, nous décrivons l'utilisation de KMnO4 pour analyser les contacts entre les récepteurs hormonaux stéroïdiens et les thymines au sein d'un élément réactif aux hormones. Bien que plusieurs résidus de pyrimidine soient fortement conservés entre différents sites de liaison des récepteurs, leur participation à la reconnaissance de séquences n'a pas été directement étudiée. En utilisant une procédure d'interférence basée sur la modification sélective de l'anneau de thymine par KMnO4, nous détectons des contacts intimes entre les récepteurs de glucocorticoïdes ou de progestérone et trois résidus de thymine au sein du site de liaison du récepteur distal du promoteur du virus de la tumeur mammaire de souris (-190/-160). Une comparaison des données de liaison obtenues avec des oligonucléotides contenant de la désoxyuridine, de la bromodésoxyuridine, de la cytosine ou de la 5'-méthylcytosine à la place des thymines démontre que le groupe méthyle de ces trois thymines contribue à l'énergie libre de liaison. Cette méthode simple pourrait être d'une utilité générale pour l'étude des interactions spécifiques des protéines avec l'ADN.