Microscopie confocale de sections épaisses provenant d'embryons intégrés dans un gel d'acrylamide

La préparation de sections épaisses et optiquement claires de tissus embryonnaires fragiles aide considérablement la puissance de la microscopie laser à balayage confocal dans l'imagerie de structures tridimensionnelles. Nous rapportons ici les conditions pour l'inclusion, la coupe et la coloration d'embryons dans des gels de polyacrylamide pour une variété de techniques d'imagerie confocale. L'infiltration des tissus dans des mélanges standards de 10-15% de monomère d'acrylamide produit, lors de la polymérisation, des blocs qui se coupent facilement par vibratome entre 50 et 1 000 microns. Ces conditions ont bien fonctionné pour des tissus précédemment teintés ou pour la teinture des sections de gel avec des fluorochromes solubles dans l'eau de faible poids moléculaire (PM < 5 kD, par ex. iodure de propidium, phalloïdine). Pour l'immunocouleur des tissus après inclusion et sectionnement, la concentration d'acrylamide a été réduite à 2-3% d'acrylamide pour permettre l'accès des immunoglobulines aux sites antigéniques ; ces gels étaient complétés par 1% d'agarose pour faciliter la section et la manipulation. Chaque méthode a permis d'obtenir des sections abondantes, optiquement claires et facilement manipulables pour le montage et l'examen dans des milieux miscibles avec l'eau.