Exigences pour la liaison de l'acide hyaluronique par CD44 : un rôle pour le domaine cytoplasmique et l'activation par un anticorps.

Le lymphome T AKR1, négatif pour CD44 (génotype CD44.2), a été transfecté avec un cDNA CD44.1. Le cDNA intact a conféré aux cellules transfectées la capacité de lier l'acide hyaluronique (HA) à la fois provenant de solution et immobilisé sur des plaques de culture. Il a également conféré une augmentation de l'adhésion dépendante de CD44 et sensible à l'hyaluronidase à une lignée cellulaire endothéliale de ganglion lymphatique. Un cDNA mutant codant pour une molécule CD44 manquant la plupart du domaine cytoplasmique de CD44 a également été transfecté dans AKR1, et le tri cellulaire a été utilisé pour sélectionner les transfectants exprimant des niveaux d'expression de CD44 à la surface cellulaire comparables à ceux de la lignée transfectée avec le cDNA CD44 de type sauvage. Les cellules transfectées avec le construct mutant ont lié l'HA fluorescéiné très peu à partir de la solution, mais ont adhéré à l'HA immobilisé, bien que moins efficacement que les cellules transfectées avec le construct de type sauvage. Ce résultat indique que le domaine cytoplasmique de CD44 est nécessaire pour la liaison de l'HA à partir de la solution mais n'est pas requis pour la liaison à l'HA immobilisé, bien qu'il puisse contribuer à l'adhésion après la reconnaissance du ligand. Un anticorps monoclonal (mAb), IRAWB 14, qui réagit avec CD44 sur toutes les cellules CD44+, a dramatiquement induit la liaison de l'HA par certaines lignées cellulaires CD44+ qui ne liaient pas constitutivement l'HA. Le transfectant exprimant une molécule CD44 avec un domaine cytoplasmique tronqué pouvait être induit par cet anticorps à lier l'HA fluorescéiné à partir de la solution. Les lymphocytes T spléniques n'ont pas lié l'HA fluorescéiné de manière constitutive. En présence de l'anticorps IRAWB 14, pratiquement tous les lymphocytes T spléniques CD44+ ont lié l'HA. L'induction était immédiate et se produisait aussi bien à température ambiante qu'à 4 degrés C, indiquant que la nouvelle activité de liaison à l'HA était due à des molécules CD44 préexistantes. Ces résultats sont compatibles avec une activation de CD44 induite par anticorps, soit par un changement conformationnel dans la molécule CD44, soit par un changement dans la distribution des molécules CD44 à la surface cellulaire.