Étude des interactions entre le réticulum endoplasmique et les mitochondries par un essai de ligature de proximité in situ dans des cellules fixées

Les interactions structurelles entre les membranes réticulaires (ER) et mitochondriales, dans des domaines connus sous le nom de membranes associées aux mitochondries (MAM), sont des hubs cruciaux pour la signalisation cellulaire et le destin cellulaire. En particulier, ces sites de contact inter-organelles permettent le transfert de calcium de l'ER aux mitochondries par le complexe de canaux de calcium à dépendance de voltage (VDAC)/protéine régulée par le glucose 75 (GRP75)/récepteur de l'inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3R). Bien que ce compartiment subcellulaire soit sous intense investigation dans des conditions physiologiques et pathologiques, aucune méthode simple et sensible n'existe pour quantifier la quantité endogène de contact ER-mitochondries dans les cellules. De même, les MAM sont des structures hautement dynamiques, et il n'existe pas d'approche appropriée pour suivre les modifications des interactions ER-mitochondries sans surexpression protéique. Ici, nous rapportons un protocole optimisé basé sur l'utilisation d'un essai de ligature de proximité in situ pour visualiser et quantifier les interactions endogènes ER-mitochondries dans des cellules fixées en utilisant la proximité étroite entre les protéines de la membrane externe mitochondriale (VDAC1) et de la membrane de l'ER (IP3R1) à l'interface MAM. Des expériences similaires de ligature de proximité in situ peuvent également être réalisées avec les paires d'anticorps GRP75/IP3R1 et cyclophiline D/IP3R1. Cet essai présente plusieurs avantages par rapport à d'autres procédures d'imagerie, car il est hautement spécifique, sensible et adapté aux tests en multiples conditions. Par conséquent, l'utilisation de cet essai de ligature de proximité in situ devrait aider à mieux comprendre les régulations physiologiques des interactions ER-mitochondries, ainsi que leur rôle dans des contextes pathologiques.