Purification du récepteur de l'insuline avec une activité de liaison complète.

Le récepteur de l'insuline a été purifié 2400 fois avec un rendement global de 40 % à partir de membranes placentaire humaines par chromatographie d'affinité sur agglutinine de germe de blé-Sepharose et insulin-Sepharose. Le récepteur a été éluté de l'insulin-Sepharose en utilisant des conditions douces, éliminant l'urée, de sorte qu'il était stable et conservait une pleine activité de liaison à l'insuline. L'analyse par chromatofocusage et filtration sur gel a indiqué que la préparation du récepteur était apparemment pure. L'électrophorèse sur gel de polyacrylamide en présence de sodium dodécyl sulfate a montré trois bandes de protéines de poids moléculaire élevé avec Mr = 320 000, 300 000 et 270 000 dans des conditions non réductrices et deux bandes de protéines majeures avec Mr = 135 000 et 90 000 dans des conditions réductrices. Le récepteur purifié a montré un graphique de Scatchard curvilinéaire avec une liaison maximale à l'insuline de 28,5 microgrammes par mg de protéine. En comparaison, le récepteur elu de l'insulin-Sepharose avec les conditions précédemment utilisées en présence d'urée a entraîné une liaison maximale à l'insuline de seulement 6 microgrammes par mg de protéine. Cela indique qu'un accroissement de 4 à 5 fois de l'activité spécifique peut être obtenu en utilisant les nouvelles conditions d'élution.