Déterminants du site d'épissage 3' pour l'auto-épissage du pré-ARNr de Tetrahymena.

L'ARN ribosomal pré-Tetrahymena subit un auto-épissage in vitro. Les composants structurels impliqués dans la reconnaissance du site d'épissage 5' ont été identifiés, mais le mécanisme par lequel le site d'épissage 3' est reconnu n'est pas établi. Pour identifier certains composants de la reconnaissance du site d'épissage 3', nous avons généré des mutations près du site d'épissage 3' et déterminé leurs effets sur l'auto-épissage. L'altération du guanosine 3'-terminal de la séquence intervenante (IVS), un nucléotide conservé dans les IVS de groupe I, a presque éliminé l'activité du site d'épissage 3'; l'intermédiaire d'épissage IVS-3' a été accumulé, et la ligation des exons était extrêmement lente. Ces mutations ne résultent pas en un recrutement de sites d'épissage 3' cryptiques, contrairement aux mutations qui affectent le site d'épissage 5'. L'altération de la cytidine précédant le guanosine 3'-terminal ou des deux premiers nucléotides de l'exon 3' a eu des effets similaires mais moins graves sur la ligation des exons. La plupart des mutants ont montré une certaine réduction (moins que trois fois) dans l'ajout de GTP au site d'épissage 5'. Une mutation qui plaçait un nouveau résidu de guanosine juste en amont du guanosine 3'-terminal a mal épissé pour produire des exons ligés avec un nucléotide supplémentaire entre les exons 5' et 3'. Nous concluons que plusieurs nucléotides, situés à la fois à l'extrémité 3' de l'IVS et dans l'exon 3', sont nécessaires pour la reconnaissance du site d'épissage 3'.