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À partir des données de séquence génomique de la souche Escherichia coli K-12, nous avons construit un ensemble complet de gènes individuels clonés codant pour des protéines étiquetées par de l'histidine avec ou sans fusion à la GFP pour l'analyse génomique fonctionnelle. Chaque clone code pour une protéine d'ORF prédite attachée à des histidines et à sept acides aminés espaceurs à l'extrémité N-terminale, ainsi qu'à cinq acides aminés espaceurs et à la GFP à l'extrémité C-terminale. Des sites de restriction SfiI sont générés aux deux extrémités N- et C-terminales de l'ORF lors du clonage, ce qui permet un transfert facile de l'ORF vers d'autres systèmes de vecteurs par coupure avec SfiI. L'expression de l'ORF clonée est sous le contrôle d'un promoteur inductible par l'IPTG, qui est strictement réprimé par le produit du gène répresseur lacI(q). L'ensemble d'ORF clonées décrit ici devrait fournir des ressources uniques pour des approches génomiques fonctionnelles systématiques comprenant (i) la construction de puces à ADN, (ii) la production et la purification de protéines, (iii) l'analyse de la localisation des protéines par le suivi de la fluorescence de la GFP et (iv) l'analyse des interactions protéine-protéine.
Kitagawa et al. (Mon,) ont étudié cette question.