Liaison et reconnaissance dans l'assemblage d'un complexe d'ubiquitine-ligase actif BRCA1/BARD1

BRCA1 est une protéine suppresseur de tumeurs du cancer du sein et des ovaires qui s'associe à BARD1 pour former un hétérodimère RINGRING. Le complexe RING BRCA1BARD1 fonctionne comme une ligase d'ubiquitine (Ub) avec une activité nettement supérieure à celle des sous-unités BRCA1 ou BARD1 individuelles. En utilisant la spectroscopie RMN et la mutagénèse dirigée par site, nous avons cartographié le site de liaison sur l'hétérodimère BRCA1BARD1 pour l'enzyme conjugatrice d'Ub UbcH5c. Les résultats montrent qu'UbcH5c se lie uniquement au domaine RING de BRCA1 et non au RING de BARD1. L'interface de liaison est formée par les première et seconde boucles Zn(2+), et l'hélice alpha centrale du domaine RING de BRCA1, une région perturbée par des mutations prédisposant au cancer. De manière inattendue, une seconde enzyme conjugatrice d'Ub, UbcH7, interagit également avec le complexe BRCA1BARD1 avec une affinité similaire, bien qu'elle ne soit pas active dans les tests d'activité de ligase d'Ub. Ainsi, la liaison seule n'est pas suffisante pour l'activité de ligase d'Ub dépendante de BRCA1.