Impairment de l'engouffrement des cellules apoptotiques par la pyocyanine, un métabolite toxique de Pseudomonas aeruginosa

RAISON D'ÊTRE : La maladie pulmonaire de la fibrose kystique se caractérise par l'accumulation de neutrophiles apoptotiques, indiquant une clairance altérée des cellules mourantes. Pseudomonas aeruginosa, le principal pathogène microbien dans la fibrose kystique, manipule l'induction de l'apoptose via la production de métabolites toxiques. On ne sait pas si ces métabolites, en particulier la pyocyanine, peuvent également moduler l'engouffrement des cellules apoptotiques. OBJECTIFS : Évaluer les effets de la pyocyanine sur l'engouffrement des cellules apoptotiques par des macrophages in vitro et in vivo et explorer les mécanismes potentiels des effets observés. MÉTHODES : Des macrophages dérivés de monocytes humains ont été traités avec de la pyocyanine avant d'être mis au défi avec des neutrophiles apoptotiques, des cellules Jurkat apoptotiques ou des billes de latex, et la phagocytose a été évaluée par microscopie lumineuse et cytométrie en flux. Les effets de la production de pyocyanine sur la clairance des cellules apoptotiques in vivo ont été évalués dans un modèle murin, en comparant l'infection par P. aeruginosa sauvage ou déficient en pyocyanine. La production d'oxydants a été étudiée à l'aide de sondes fluorescentes et d'inhibition pharmacologique, et le signalement des GTPases Rho par immunoblotting et études d'inhibiteurs. MESURES ET RÉSULTATS PRINCIPAUX : Le traitement à la pyocyanine a altéré l'engouffrement des cellules apoptotiques par les macrophages in vitro, sans induire une apoptose significative des macrophages, tandis que l'absorption de billes de latex a été préservée. L'ingestion des cellules apoptotiques par les macrophages a été réduite et les cellules tardivement apoptotiques/nécrotiques ont été augmentées chez les souris infectées par P. aeruginosa produisant de la pyocyanine par rapport à la souche déficiente en pyocyanine. L'inhibition de l'absorption des cellules apoptotiques impliquait la génération intracellulaire d'espèces réactives de l'oxygène (ERO) et des effets sur le signalement des GTPases Rho. Les antioxydants ou le blocage du signalement Rho ont considérablement restauré l'engouffrement des cellules apoptotiques. CONCLUSIONS : Ces études démontrent que P. aeruginosa peut manipuler le microenvironnement inflammatoire en inhibant l'engouffrement des cellules apoptotiques, et suggèrent des stratégies potentielles pour limiter l'inflammation pulmonaire dans la fibrose kystique.