Dépistage des mutations par clivage d'appariement enzymatique avec l'endonucléase T4 VII.

Chacun des quatre ensembles possibles de mésappariements (G.A/C.T, C.C/G.G, A.A/T.T et C.A/G.T) contenant les 8 possibles mésappariements de base simple dérivés de mutations isolées a été examiné pour tester la capacité de l'endonucléase T4 VII à détecter de manière cohérente les mésappariements dans les hétéroduplexes. Au moins deux exemples de chaque ensemble de mésappariements ont été étudiés pour le clivage dans les paires complémentaires d’hétéroduplexes formés entre l’ADN normal et mutant. Quatre mutations par délétion ont également été incluses dans cette étude. Les divers produits dérivés de la PCR utilisés dans la formation des hétéroduplexes variaient de 133 à 1502 pb. Au moins un exemple de chaque ensemble a montré un clivage d'au moins un brin contenant un mésappariement. Le clivage d'au moins un brin des paires d'hétéroduplexes s'est produit dans 17 des 18 mutations de base simple connues testées, avec un ensemble A.A/T.T qui n'a pas été clivé dans aucun brin mésapparié. Nous proposons que cette méthode puisse être efficace pour détecter et positionner presque tous les changements mutationnels lorsque l'ADN est dépisté pour des mutations.