Localisation simultanée de la myosine et de la tubuline dans des cellules de culture tissulaire humaines par coloration à double anticorps

Nous avons étudié la distribution des molécules de myosine et de tubuline à l'intérieur des mêmes cellules de culture tissulaire en utilisant deux anticorps marqués avec des fluorochromes contrastants. L'anticorps anti-myocine, levé contre la myosine des plaquettes humaines, a été marqué avec de la rhodamine. L'anticorps anti-tubuline, levé contre les cristaux de tubuline induits par la vinblastine d'oursins, a été marqué avec de la fluorescéine. Les deux anticorps ont coloré des structures entièrement différentes à l'intérieur de la même cellule plate en interphase : l'anticorps anti-myocine s'est lié aux fibres de stress et l'anticorps anti-tubuline s'est lié aux fibres fines et ondulées considérées comme des microtubules individuels. Des cellules en interphase compactes se sont colorées de manière diffuse avec les deux anticorps. De la prophase jusqu'à la début de l'anaphase, les deux anticorps ont coloré le fuseau mitotique, bien que le contraste de fluorescence entre le fuseau et le cytoplasme était beaucoup plus élevé avec l'anticorps anti-tubuline qu'avec l'anticorps anti-myocine. De l'anaphase à la télophase, une forte coloration anti-myocine est apparue dans le sillon de clivage, tandis que l'anticorps anti-tubuline a coloré la région entre les chromosomes séparés. Cette étude a établi la faisabilité de la localisation d'anticorps fluorescents à haute résolution de paires de protéines de motilité dans le cytoplasme de cellules uniques, une approche qui permettra de cartographier les sites des diverses interactions de protéines contractiles in situ.