Une comparaison des protéases extracellulaires de trois souches psychrotrophes de Pseudomonas fluorescens.

Les protéases extracellulaires de trois souches psychrotrophes de Pseudomonas fluorescens ont été purifiées et caractérisées. La température de culture a influencé de manière décisive l'excrétion de protéase dans le milieu. La production enzymatique la plus élevée a eu lieu à 10 °C (une souche) ou 20 °C (deux souches). Les protéases purifiées avaient un poids moléculaire compris entre 47 kDa et 51 kDa, avec des valeurs de pI variant de 7.8 à 7.4. Les trois protéases étaient caractérisées par plusieurs bandes étroitement focalisées. La sensibilité aux agents chélateurs de métaux indique que les protéases de P. fluorescens sont des métalloprotéases (EC 3.4.24). Le pH optimal pour l'activité azocaseinolytique se situait à pH 6-7, l'optimum de température était de 40-45 °C. Les énergies d'activation apparentes étaient de 36.9-38.0 kJ mol-1. Les protéases étaient thermolables. En ajoutant des ions calcium, une stabilité thermique croissante a été observée. Le SDS, l'urée et plusieurs ions métalliques ont inhibé l'activité protéolytique à des degrés divers. La caséine était le substrat préféré des protéases. Avec des concentrations de caséine allant jusqu'à 0.4-0.75 %, une cinétique de type Michaelis-Menten a été observée, tandis qu'à des concentrations de caséine plus élevées, une inhibition par le substrat s'est produite. Aucune des protéases n'a montré d'activité aminopeptidase.