रिवर्स फेज प्रोटीन एरे: एक नवीन प्रोटिओमिक तकनीक का सत्यापन और प्राथमिक ल्यूकेमिया नमूनों और हेमाटोपोएटिक स्टेम कोशिकाओं के विश्लेषण के लिए उपयोगिता

प्रोटिओमिक्स में कैंसर पैथोजेनेसिस में उत्तर प्रदान करने और लक्षित चिकित्सा को निर्देशित करने की क्षमता है, जो प्रोटीन अभिव्यक्ति स्तरों और सक्रियण स्थिति के व्यापक विश्लेषण के माध्यम से होती है। इस क्षमता की पूरी तरह से प्राप्ति के लिए रोगी नमूनों पर प्रोटीन एरे प्रदर्शन के लिए नई, त्वरित, उच्च-थ्रूपुट तकनीकों का विकास आवश्यक है, साथ ही उन्हें व्याख्यायित करने के लिए नवीन विश्लेषणात्मक तकनीकों की भी आवश्यकता है। यहाँ, हम प्राथमिक तीव्र मायेलोजेनस ल्यूकेमिया नमूनों के साथ-साथ ल्यूकेमिक और सामान्य स्टेम कोशिकाओं के विश्लेषण के लिए रिवर्स फेज प्रोटीन एरे (RPPA) के उपयोग का सत्यापन और मजबूती वर्णित करते हैं। इस रिपोर्ट में, हम दिखाते हैं कि एरे प्रिंटिंग, पता लगाने, प्रवर्धन, और रंगाई की सटीकता बहुत उच्च और पुनरुत्पादनीय है, और वे पारंपरिक वेस्टर्न ब्लॉटिंग के साथ संबंधित हैं। एक ही नमूने की प्रतियों का उपयोग करके, एक ही और/या अलग-अलग एरेज़ पर, या एक ही प्रारंभिक नमूने से तैयार अलग-अलग प्रोटीन नमूनों का उपयोग करते हुए, आंतरिक और अंतर-एरे पुनरुत्पाद्यता अत्यंत उच्च थी। एरे सेटअप के भीतर प्रोटीन सिग्नल तीव्रताओं में कोई सांख्यिकीय रूप से महत्वपूर्ण अंतर नहीं पाया गया। सक्रियण स्थिति (फॉस्फोराइलेशन) विलंबित प्रसंस्करण और कई बार फ्रीज-थॉawed नमूनों की तैयारी के परीक्षणों में बनी रही। प्रोटीन अभिव्यक्ति में अंतर विश्वसनीय रूप से केवल तीन कोशिका प्रोटीन समतुल्यों में भी पहचाना जा सकता था। दुर्लभ सामान्य और ल्यूकेमिक स्टेम कोशिका आबादियों से तैयार RPPA सफलतापूर्वक किए गए और उन्होंने सुदृढ़ कोशिका आबादियों से भिन्नताएँ दिखाई। उदाहरण दिखाते हैं कि RPPA लक्षित पहचान, सत्यापन, और दवा खोज के बड़े पैमाने पर विश्लेषण के लिए आदर्श रूप से उपयुक्त है। संक्षेप में, RPPA एक अत्यंत विश्वसनीय, पुनरुत्पादनीय, उच्च-थ्रूपुट प्रणाली है जो प्राथमिक तीव्र मायेलोजेनस ल्यूकेमिया कोशिकाओं, कोशिका लाइनों, और मानव स्टेम कोशिकाओं में प्रोटीन अभिव्यक्ति और फॉस्फोराइलेशन स्थिति के त्वरित बड़े पैमाने पर प्रोटिओमिक विश्लेषण की अनुमति देती है।