セミネステッドリアルタイム逆転写PCRに基づく高感度手法によるヒト免疫不全ウイルス1型の未スプライスおよび多重スプライスRNAおよびプロウイルスDNAの定量

ヒト免疫不全ウイルス1型（HIV-1）感染の治療における標準的な治療法である高活性抗レトロウイルス療法（HAART）の効果は、血漿中のウイルスRNA量を測定することで評価されます。患者がHIV-1の血漿中の量が商業的アッセイの検出限界を下回る場合、成功裏に治療されたと見なされます。しかし、HAARTを受けている患者でもウイルスの複製と進化は続いており、最終的には薬剤耐性HIV-1株の発生や治療失敗につながります。この低レベルのウイルス複製を末梢血単核細胞（PBMC）で監視するためには、HIV-1の分子マーカーを測定するための高感度な方法が必要です。我们は、PBMCにおける未スプライスおよび多重スプライスHIV-1 RNAおよびプロウイルスDNAの定量のための高感度手法の開発を報告します。これらの方法は、リアルタイムPCRの正確性と精度、およびネステッドPCRの感度を組み合わせた革新的なセミネステッドリアルタイム逆転写PCR（RT-PCR）に基づいています。我々は、新たに開発された方法が、臨床サンプル中のHIV-1 RNAおよびDNAの感度、精度、動的範囲、および定量的検出力において従来の単一段階リアルタイムRT-PCRよりも優れていることを示します。これらの実施が容易な方法は、ウイルス複製の細胞内プロセスを監視するための臨床研究を含む研究に広く利用できる。