多レクチン親和性クロマトグラフィーとLC‐MS/MSによる人間の肺腺癌に対する推定血清糖タンパク質バイオマーカーの同定

人間の血清中の糖タンパク質は多くの生物学的プロセスにおいて基本的な役割を果たしており、疾患の進行や治療のバイオマーカーとして臨床的な価値も持っています。本研究では、三人の健康な個体と三人の肺腺癌患者の血清から多レクチン親和性クロマトグラフィーを用いて糖タンパク質を分離しました。回収された糖タンパク質は、ペプチド-N-グリコシダーゼF (PNGase F) による処理とトリプシンによるゲル内消化を受けました。トリプシンペプチドは、ESI-MS/MSに結合したナノLCによって分析され、MS/MSスペクトルはBioworks 3.2および社内のバイオインフォマティクスツールであるProtAnによって処理されました。特定されたタンパク質の約90%に、1つ以上の潜在的な糖鎖付加部位が含まれていました。健康な個体と腺癌患者の血清糖タンパク質群を比較したところ、38の癌選択的タンパク質が明らかになりました。その中で、60%は以前に人間の血清中の低濃度タンパク質として報告されています。血清や血漿中の肺癌の潜在的な指標として以前に特徴づけられた、ハプトグロビン (HP)、インターアルファトリプシン抑制因子重鎖4 (ITI-H4)、補体C3前駆体、ロイシンリッチアルファ-2-糖タンパク質など、いくつかの癌選択的タンパク質を同定しました。さらに、プラズマカリクレイン (KLKB1) とインターアルファトリプシン抑制因子重鎖3 (ITI-H3) が肺癌群で上昇する可能性があることが同定され、西部ブロット分析によって検証されました。さらに、約18 kDaのプラズマカリクレインタンパク質断片が28人の腺癌患者中25人で高濃度で検出され、8人の正常個体のうち1人が中程度の陽性を示しました。結果は、KLKB1が肺癌の潜在的な血清バイオマーカー候補であることを示唆しています。