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RNA 시퀀싱은 마이크로 RNA (miRNA)에 대한 다른 정량화 방법보다 장점을 제공하지만, 수많은 편향으로 인해 신뢰할 수 있는 정량화가 어려워집니다. 이전의 이러한 편향에 대한 평가에서는 한정된 역전사 편향 또는 증폭 편향의 평가로 어댑터 링잉 편향에 초점을 맞추었습니다. 또한, 이소미르 (miRNA 아이소폼)에 대한 정량화 평가나 시작량이 성능에 미치는 영향에 대한 평가는 매우 제한적이었습니다. 변형된 길이의 이소미르 정량화를 평가한 연구는 없었으며, 여러 중간 시작 입력에서 도출된 결과의 일관성을 비교한 연구도 없었습니다. 따라서 우리는 네 가지 라이브러리 준비 키트를 사용하여 다양한 시작량으로 miRNA 및 이소미르의 정량화를 평가하였으며, 고유 분자 식별자 (UMI)를 사용하여 중복 리드를 제거한 후의 정량화도 수행하여 역전사 및 증폭 편향을 완화하였습니다. 모든 방법은 잘못된 이소미르 검출을 초래했지만, 테스트한 어댑터 없는 방법은 특히 잘못된 이소미르 검출에 취약했습니다. 우리는 UMI를 사용하면 정확성이 향상된다는 것을 보여주며 일관성을 개선하기 위한 입력량 가이드를 제공합니다. 우리의 데이터는 현재 방법의 차이점과 한계를 보여주어 연구 전반에 걸친 miRNA 및 이소미르 정량화의 유효성에 대한 우려를 제기합니다. 우리는 miRNA 정량화의 정확성과 신뢰성을 향상시키기 위해 UMI의 사용을 권장합니다.
Wright et al. (Fri,)는 이 질문을 연구했습니다.