Novo ensaio de remodelação de ECM 3D de alto rendimento identifica MEK como o principal impulsionador da atividade de fibroblastos fibrosos

RESUMO Em tecidos fibrosos, fibroblastos ativados remodelam a matriz extracelular (ECM) rica em colágeno. Intervir nesse processo representa uma estratégia terapêutica candidata para atenuar a progressão da doença. Modelos que geram dados quantitativos sobre a remodelação de ECM mediada por fibroblastos 3D com a reprodutibilidade e rendimento necessários para testes de medicamentos estão em falta. Aqui, desenvolvemos um modelo que atende a esse propósito e produz informações quantitativas combinadas sobre eficácia e citotoxicidade de drogas. Usamos robótica de microinjeção para projetar padrões de aglomerados de fibroblastos embebidos em colágeno fibrilar e aplicamos microscopia automatizada e análise de imagem para quantificar a remodelação da ECM entre e a viabilidade celular dentro de aglomerados de fibroblastos humanos primários ativados por TGFβ da pele ou pulmão. Aplicamos este ensaio à triagem de compostos e revelamos alvos acionáveis para suprimir a remodelação da ECM fibrosa. Surpreendentemente, descobrimos que, após uma fase inicial de ativação dos fibroblastos por TGFβ, a sinalização canônica de TGFβ é dispensável e, em vez disso, a ativação não canônica da sinalização MEK-ERK impulsiona a remodelação da ECM. Além disso, revelamos que concentrações mais altas de dois inibidores de receptor de TGFβ, enquanto bloqueiam a sinalização canônica de TGFβ, de fato estimulam essa atividade de remodelação de ECM profibrótica mediada por MEK.