Un método de ensamblaje de fragmentos grandes mediado por CRISPR-Cas9 para clonar genomas y clústeres de genes biosintéticos

La capacidad de clonar grandes fragmentos de ADN de genomas es valiosa tanto para la investigación básica como aplicada, como la construcción de genomas sintéticos y la expresión de clústeres de genes biosintéticos (BGCs) para el descubrimiento de productos naturales. Aquí, informamos sobre una plataforma rápida y eficiente para la captura directa de DNAs genómicos, combinando CRISPR y ensamblaje de Gibson. Demostramos este método con la capacidad de clonar grandes fragmentos de ADN que varían de 30 a 77 kb de varios genomas hospedadores, logrando una fidelidad de clonación cercana al 100% para fragmentos de ADN por debajo de 50 kb. A continuación, demostramos este método clonando un fragmento de 40 kb de Streptomyces ceruleus A3(2), que es rico en BGCs para productos naturales; y utilizamos este método para clonar el clúster de genes sintéticos de 40 kb fengicina de B. subtilis 168, que codifica para una clase de péptidos con bioactividad. Este método ofrece oportunidades eficientes y simples para ensamblar grandes construcciones de ADN de fuentes distantes.