Un ensayo de desplazamiento por movilidad electroforética utilizando la proteína aislada de plantas huésped

Resumen Antecedentes El ensayo de desplazamiento por movilidad electroforética (EMSA) es una tecnología común para detectar interacciones ADN-proteína. Sin embargo, en la mayoría de los casos, la proteína utilizada en EMSA se obtiene a través de expresión procariota, y rara vez de plantas. Al mismo tiempo, las proteínas expresadas a partir de sistemas procariotas generalmente no pueden plegarse de manera natural y carecen de modificaciones post-traduccionales, lo que puede afectar la unión de las proteínas al ADN. Resultados Aquí, desarrollamos una técnica para aislar rápidamente proteínas de interés de plantas huésped y luego analizarlas utilizando EMSA fluorescente. Este sistema tecnológico se llama: método de EMSA fluorescente de proteínas de plantas (PPF-EMSA). En PPF-EMSA, se emplea un método de transformación transitoria especial para introducir transitoriamente genes en la planta, lo que permite la síntesis eficiente de las proteínas codificadas. Luego, la proteína objetivo se aísla utilizando inmunoprecipitación, y las sondas de ADN se etiquetan con cianina 3 (Cy3). Tanto EMSA fluorescente como EMSA fluorescente de desplazamiento super pueden llevarse a cabo utilizando las proteínas de plantas. Se utilizan tres tipos de plantas, Betula platyphylla, Populus. davidiana×P. bolleana y Arabidopsis thaliana, en este estudio. Las proteínas aisladas de plantas están en un estado natural, pueden plegarse de manera natural y están modificadas post-traducionalmente, lo que permite la verdadera unión a sus ADN cognados. Conclusión Dado que la transformación transitoria se puede realizar rápidamente y no depende de si la transformación estable está disponible o no, creemos que este método tendrá una amplia aplicación, permitiendo el aislamiento de proteínas de plantas huésped de manera conveniente.