BTK에서 SH3 도메인의 인산화된 Y223은 촉매 활성을 반영하지만 생물학적 기능에는 영향을 미치지 않습니다.

브루톤 타이로신 키나제(BTK)는 B세포 생존에 필요한 효소이며, 그 억제제는 B세포 악성 종양 치료를 위한 강력한 표적 약물이 되었습니다. 세포질 단백질-타이로신 키나제의 초기 활성화 사건은 촉매 도메인에서 보존된 조절 타이로신의 인산화이며, BTK에서 이는 타이로신 551로 나타냅니다. 또한, SRC 동종성 3(SH3) 도메인에 있는 타이로신 223(Y223) 잔기는 20년 이상 전체 효소 활성을 위해 필요하다고 일반적으로 여겨져 왔습니다. 이 잔치의 잠재적 중요성 최초의 인식은 비림프구 세포를 사용하는 변환 분석에서 발생합니다. 이 잔기의 생물학적 중요성을 확인하기 위해, 우리는 인산화를 금지하면서 방향족성과 부피를 유지하는 타이로신을 페닐알라닌으로 치환(Y223F)하는 CRISPR-Cas 매개 키낙인 마우스를 제작하였습니다. 백혈구 하위 집합 및 림프조직 형태, 그리고 체액 면역 반응을 연구하기 위한 일련의 분석을 사용했을 때, 우리는 야생형 마우스와 Y223F 변이체 사이에 차이를 감지할 수 없었습니다. 비가역 BTK 억제제에 저항성을 나타내는 마우스는 시스테인 481에서 세린으로의 치환(C481S)을 통해 추가 면역화 대조군 역할을 하였으며, Y223F와 야생형 동물과 유사한 체액 면역 반응을 나타냈습니다. 집합적으로, 우리의 발견은 Y223의 인산화가 BTK의 내인성 기질인 포스포리파제 Cγ2(PLCG2)의 인산화를 위한 유용한 대리 지표라고 제안합니다. 그러나 흔히 유지되는 개념과는 달리, 이 후처리 수정은 BTK 기능에 필수적이지 않습니다.