효과적인 렌티바이러스(LV) 전달은 CAR-T 제조의 핵심이지만, 성능은 종종 특정 구조체에 따라 다르고 생산 및 전달 매개변수에 매우 민감하다. 우리는 낮은 성능을 보이는 anti-FITC-CAR를 Jurkat E6-1 세포에서 사용하는 단계적 최적화 워크플로우를 개발하고, 잘 수행되는 HER2 CAR(pHRSFFv₄D5-WT-Highest)로 일반화 가능성을 검증한 후 1차 PBMC에서 변환 시험을 진행했다. 이 전략은 LV 농도, 전달 중 짧은 교반, 패키징 시스템, DNA 투입 균형, 전달 증강제 추가를 순차적으로 조정했으며, 결과는 유세포 분석(tdTomato 및 HA 또는 c-myc 태그)으로 정량화했다. 농축된 상층액과 짧은 2시간 교반 단계는 신호 명확성과 수율을 향상시켰으며, 대체 패키징 플라스미드 도입과 적절한 DNA 재조정은 성능을 더욱 증가시켰다. 저용량 증강제를 사용한 경우, Jurkat 세포에서 anti-FITC-CAR의 전달은 약 1%에서 40~50% tdTomato + HA + 세포(약 5~50배 향상, 96시간)로 증가했다. 이미 효율적인 HER2 구조체도 약 76%에서 88%로 증가하여 워크플로우가 높은 기준 벡터에도 유용함을 나타냈다. PBMC에서는 동일 조건으로 96시간에 약 10%의 전달을 달성하여 1차 T세포의 높은 저항성을 반영하고, 보완 단계들을 통한 향후 개선 가능성을 시사했다. 전반적으로 이 모듈화되고 복잡도가 낮은 최적화는 낮은 성능 구조체를 회복시키고 견고한 벡터를 점진적으로 향상시키는 재현 가능한 틀을 제공하여 신뢰도 높은 실험실 규모 CAR-T 공학을 지원하며, 1차 T세포 프로토콜을 위한 접근 가능한 출발점을 제시한다.
Ferreira 등(목요일)이 이 문제를 연구했다.