Microensayo simple, rápido y cuantitativo para la detección de anticuerpos neutralizantes del virus de la inmunodeficiencia humana

Se describe un microensayo simple, rápido y cuantitativo para la detección de aislamientos del virus de la inmunodeficiencia humana (HIV-I). Se identificó y se hizo adherente un clon sensible al virus-sincitio de células CEM (CEM-SS) en platos de microtitulación de fondo plano de 96 pozos. Tras la adición del virus, estas células desarrollan fácilmente sincitios adherentes y cuantificables sobre un fondo de monocapa de CEM-SS normal y confluyente en 4 a 6 días. Se obtuvieron cinéticas de un solo impacto para la formación de sincitios en varias multiplicidades de infección. Los sincitios están asociados con la producción completa de viriones y la localización citoplasmática de la proteína central p24 (detectada por inmunofluorescencia). El virus infeccioso total puede determinarse con precisión en este ensayo; estos resultados mostraron una estrecha correlación con la inducción de p24 y gp120 cuando los sobrenadantes de los pozos de microtitulación se pasaron a células frescas y se evaluaron mediante un radioinmunoensayo competitivo. Los estudios de inducción de antígeno p24 en el punto final de la formación de sincitios indican que no hay variantes no sincitiales detectables en las existencias estándar de HIV-I. Seis aislamientos divergentes de HIV-I (HTLV-IIIB, -RFII, -MN, -RUTZ, -CC y LAV-1), así como HTLV-IIIB y LAV-1 reisolados de chimpancés persistentemente infectados, producen sincitios cuantificables que varían ligeramente en su morfología de desarrollo. Los títulos de neutralización precisos se obtienen fácilmente de curvas de multiplicidad construidas a partir de diluciones seriadas de sueros de prueba. Dentro de este sistema hay un método flexible para estudiar varias cinéticas de interacciones anticuerpo/virus, además de estudios de bloqueo e interferencia con cualquier compuesto antiviral candidato.